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技術(shù)文章

一文搞定胰島素(INS)ELISA試劑盒的操作方法

更新時(shí)間:2022-10-25 瀏覽次數(shù):880

  胰島素(INS)ELISA試劑盒的操作步驟:
 
  1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
 
  2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
 
  3、待測樣本孔先加樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白孔不加。
 
  4、除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
 
  5、棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
 
  6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
 
  7、每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
 
  胰島素(INS)ELISA試劑盒的操作注意事項(xiàng):
 
  (1)試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
 
  (2)實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
 
  (3)濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白,按照說明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍,最終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度。
 
  (4)嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。
 
  (5)所有液體組分使用前充分搖勻。

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